超低溫冷凍療法常用的冷凍降溫方法

時(shí)間:2020-05-19 09:10來(lái)源: 作者:班德液氮罐 點(diǎn)擊: 次
研究表明，不同材料采用超低溫冷凍法脫毒時(shí)冷凍降溫方法直接關(guān)系到成苗率，選擇合適的冷凍方法對脫毒成功與否至關(guān)重要。不同冷凍降溫方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，根據材料特性選擇適合的方法。目前常用的冷凍方法有：快速降溫法、慢速冷凍法、逐級冷凍法、干燥冷凍法、玻璃化冷凍法、包埋玻璃化法等。直接將預培養材料投入液氮中的快速降溫法具有操作簡(jiǎn)單、不需要特殊設備的優(yōu)點(diǎn)，但是對含水量高的愈傷組織其成活率為零，不適用該方法。液氮罐廠(chǎng)家

將材料從0℃逐漸降到-100℃，使得其細胞中的含水量逐漸流出到細胞外，細胞中的含水量降到最低程度，然后再從-100℃直接投入液氮中降到-196℃，這樣可以避免水分在細胞中結冰而破壞細胞，這種慢速冷凍法可以提高成活率。一般細胞在-10℃時(shí)細胞外的介質(zhì)基本形成結晶，而細胞內部并未結冰，這樣形成細胞內外的蒸氣壓差，如果使細胞在不同低溫下-20，-50，-70，-100℃下各處理一段時(shí)間，使細胞內的水溶液在蒸氣壓下向細胞外不斷擴散，脫水后細胞內原生質(zhì)逐漸發(fā)生濃縮，其冰點(diǎn)降低，再投入液氮中時(shí)就減弱低溫結冰對細胞造成的傷害，大大提高回復率和成活率，這種逐級冰凍方法在多數材料超低溫保存中獲得成功。對于含水量較高的愈傷組織，采用將材料進(jìn)行脫水預處理，然后迅速投入液氮。這樣細胞經(jīng)過(guò)脫水處理后細胞內部含水量大大降低，原生質(zhì)的濃度大大提高，提高愈傷組織的冷凍處理后的恢復成活率。用一種保護劑PVS2[其組成為：30%（W/V）甘油+15%（W/V）乙二醇+15%（W/V）DMSO+0.4mol/L蔗糖]對材料進(jìn)行處理后再迅速投入到液氮中，細胞經(jīng)過(guò)保護劑處理后可以避免細胞胞內外形成冰晶，而形成玻璃化狀態(tài)，這種方法成活率高，但是很容易脫水過(guò)度，影響成活率，采取與逐級冷凍法結合處理來(lái)提高恢復率。當材料較多時(shí)，可以先采用褐藻酸鈣將材料進(jìn)行包埋，然后用高蔗糖濃度的培養基脫水預處理，再用干燥的硅膠進(jìn)行脫水處理，再迅速投入到液氮中。為了保證成活率，經(jīng)常結合幾種冷凍降溫方法合并使用。液氮罐廠(chǎng)家
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