細胞的液氮冷凍保存復蘇技術(shù)

時(shí)間:2020-09-08 10:34來(lái)源: 作者:班德液氮罐 點(diǎn)擊: 次
細胞株（系）的使用，為醫學(xué)研究和測試工作帶來(lái)了極大的方便。但細胞的傳代是有限制的，長(cháng)期連續傳代的細胞，不僅消耗大量的人力和物力，而且細胞的生長(cháng)與形態(tài)等會(huì )有一定退變或轉化，因而細胞失去原有的遺傳特性，有時(shí)還會(huì )由于細胞污染而造成傳代中斷，種子丟失。因此，在實(shí)際工作中常需凍存一定數量的細胞，以備替換使用。細胞冷凍與復蘇是細胞培養室的常規工作和通用技術(shù)。

    細胞的凍存概述

    目前，細胞凍存常用的技術(shù)是液氮冷凍保存法，主要采用加適量保護劑的緩慢冷凍法凍存細胞。細胞在不加任何保護劑的情況下直接冷凍，細胞內外的水分會(huì )很快形成冰晶，從而引起一系列不良反應。如細胞脫水使局部電解質(zhì)濃度增高，pH值改變，部分蛋白質(zhì)由于上述原因而變性，引起細胞內部空間結構紊亂，溶酶體膜由此遭到損傷而釋放出溶酶體酶，使細胞內結構成分造成破壞，線(xiàn)粒體腫脹，功能丟失，并造成能量代謝障礙。胞膜上的類(lèi)脂蛋白復合體也易破壞引起細胞膜通透性的改變，使細胞內容物丟失。如果細胞內冰晶形成較多，隨冷凍溫度的降低，冰晶體積膨脹造成細胞核DNA空間構型發(fā)生不可逆的損傷，而致細胞死亡。液氮罐

    因此，細胞冷凍技術(shù)的關(guān)鍵是盡可能地減少細胞內水分，減少細胞內冰晶的形成。采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質(zhì)分子量小，溶解度大，易穿透細胞，可以使冰點(diǎn)下降，提高細胞膜對水的通透性，且對細胞無(wú)明顯毒性。慢速冷凍方法又可使細胞內的水分滲出細胞外，減少胞內形成冰結晶的機會(huì )，從而減少冰晶對細胞的損傷。液氮罐
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